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背景：

成纖維細胞生長因子 9（FGF9）又稱膠質激活因子或肝素結合生長因子 9，是成纖維細胞生長因子（FGF）家族的成員。成纖維細胞生長因子家族成員具有廣泛的有絲分裂和細胞存活活性:，參與多種生物過程，包括胚胎發(fā)育、細胞生長、形態(tài)發(fā)生、組織修復、腫瘤生長和侵襲。這種蛋白質是作為一種分泌因子分離出來的，對培養(yǎng)的神經膠質細胞具有生長刺激作用。在神經系統(tǒng)中，這種蛋白主要由神經元產生，可能對膠質細胞的發(fā)育很重要。研究發(fā)現(xiàn)，小鼠同源基因的表達依賴于聲子刺猬（Shh）信號傳導。缺乏該同源基因的小鼠表現(xiàn)出雄雌性別逆轉的表型，這表明它在睪丸 胚胎發(fā)生中的作用。FGF9在胚胎發(fā)育、細胞增殖、細胞分化和細胞遷移的調控中發(fā)揮著重要作用。FGF9 可能在神經膠質細胞發(fā)育過程中的生長和分化、腦組織損傷后修復和再生過程中的神經膠質增生、神經元細胞的分化和存活以及神經膠質腫瘤的生長刺激中發(fā)揮作用。

標記：

1.將細胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養(yǎng)基。

2.提前將2×EdU標記培養(yǎng)基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養(yǎng)基與等體積細胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2 h，棄培養(yǎng)基。

【注】：①培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)。②大多數(shù)腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養(yǎng)基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。

3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。

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