商品屬性:
產品名稱 | 重組小鼠白介素-33,His-標簽無動物源IL-33 | 英文名稱 | Mouse IL-33 Protein, His tag (Animal-Free) |
規格 | 5 μg/20 μg/100 μg/1 mg | 貨號 | EY-01X8761 |
運輸條件 | 藍冰運輸 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
背景:
白細胞介素 33(IL-33)是一種 17.65 kDa 的細胞因子,含有 159 個氨基酸殘基。IL-33 是 IL-1 家族的成員,由肥大細胞、巨噬細胞、內皮細胞和上皮細胞等多種細胞類型分泌。當 IL-33 與主要在肥大細胞和 Th2 細胞中表達的 ST2 受體結合時,IL-33 會激活 NF-κB 和 MAPK 信號通路,從而刺激 IL-5 和 IL-13 等 2 型細胞因子的分泌。除了 Th2 型反應外,IL-33 還參與維持屏障組織防御。
標記:
1.將細胞培養基與EdU溶液按照500:1的比例混合,制成2×EdU標記培養基。
2.提前將2×EdU標記培養基預熱,然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合,獲得1×EdU溶液。
【注】:①不建議替換全部培養基,這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養基建議現用現配,用量以沒過細胞為宜。
3.孵育細胞2 h,棄培養基。
【注】:①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。
4.以1xPBS清洗細胞兩次,每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。
【注】:對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。
實驗步驟:
1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中,加入 100μL 培養基,含或不含待測化合物。在 CO2 培養箱中在 37℃ 下培養細胞 24 小時。
2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。
3. 在培養箱中將培養板培養適當時間(如 6、12、24 或 48 小時)。
4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。
5. 將平板在培養箱中孵育 1-4 小時。
6. 在讀板之前,在定軌振蕩器上輕輕混勻。
7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。
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