盤長孢菌菌種的鑒定方法
(1)常規鑒定 常規鑒定內容有形態特征和生理生化特征。形態特征包括顯微形態和培養特征;理化特性包括營養類型、碳氮源利用能力、各種代謝反應、酶反應等。
(2)分子生物學鑒定 應用分子生物學方法從遺傳進化角度闡明微生物種群之間的分類學關系,是目前微生物分類學研究普遍采用的鑒定方法。CICC擁有微生物菌種分類鑒定的分子生物學實驗室,配有PCR儀、高速冷凍離心機、電泳儀、HPLC、凝膠成像系統、紫外控溫分析系統等先進儀器設備,以及DNAMAN、BIOEDIT、CLUSTALX、TREEVIEW等序列分析軟件。盤長孢菌目前CICC可采用核酸序列分析法分析細菌16S rDNA/16S-23S rDNA區間序列、酵母18S rDNA/26S rDNA(D1/D2)序列及絲狀真菌的18S rDNA/ ITS1-5.8S-ITS2序列,提供科學的鑒定結果。
(3)功能性分析及功能基因 經單位不斷致力于工業微生物資源的功能及其功能基因研究,目前通過木聚糖酶、纖維素酶、葡萄糖異構酶、β-甘露聚糖酶等功能基因的克隆進行菌種產酶的功能性分析。應用gyrA、atpD及pheS等看家基因于微生物菌種鑒定,在某些種、亞種、株間有較好的分辨效果。(4)API細菌數值鑒定系統 API鑒定系統涵蓋15個鑒定系列,約有1000種生化反應,目前已可鑒定超過600種的細菌。鑒定過程中,可根據細菌所屬類群選擇適當的生理生化鑒定系列,通過軟件將待測細菌與數據庫參比,得出鑒定結果。 CICC目前可應用API 50CH系列、API 20 E系列、API Staph系列對乳酸桿菌(Lactobacillus sp.)和相關細菌、芽孢桿菌(Bacillus sp.)、葡萄球菌屬(Staphylococcus sp.)、微球菌屬(Micrococcus sp.)和庫克菌屬(Locuria sp.)進行鑒定。(5)RAPD、SSCP技術 隨著微生物菌種應用的進一步發展,在食品安全管理、生物產品出口認證、知識產權保護等行業需求日益增加,盤長孢菌菌種株水平的鑒別技術成為一個迫切需要解決的問題。
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